2023年5月2日,，接國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局通知,，首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院任鋒教授團(tuán)隊(duì)獲批CRISPR技術(shù)在HBV cccDNA檢測(cè)領(lǐng)域的第一項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利——“基于PCR-CRISPR-cas13a檢測(cè)乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA的試劑盒”（圖1）。

圖1 “基于PCR-CRISPR-cas13a檢測(cè)乙型肝炎病毒共價(jià)閉合環(huán)狀DNA的試劑盒”發(fā)明專(zhuān)利證書(shū)

HBV感染是影響全世界人民健康的主要公共衛(wèi)生問(wèn)題,，有超過(guò)2.5億的HBV感染者,。主要的抗病毒藥物如核苷（酸）類(lèi)似物（NAs）和α干擾素（IFNα）等都不能完全治愈HBV，根本原因在于不能徹底清除的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）,。HBV cccDNA是病毒RNA復(fù)制轉(zhuǎn)錄的模板,，它以微染色體的形式長(zhǎng)期穩(wěn)定的存在于肝細(xì)胞核中。因此,，建立一種有效的HBV cccDNA檢測(cè)方法,，對(duì)于臨床抗病毒治療效果的評(píng)價(jià)和治療策略的調(diào)整都具有重要意義。目前,，檢測(cè)HBV cccDNA的方法有Southern印跡雜交,、巢式PCR、RCA和微滴數(shù)字PCR（ddPCR）,，但由于這些方法存在操作復(fù)雜,、靈敏度低和成本較高等局限性沒(méi)有被廣泛使用。

規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)序列及其相關(guān)蛋白（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated proteins,， CRISPR/Cas）是大多數(shù)細(xì)菌及古細(xì)菌中抵御病毒入侵的一種獲得性免疫方式,。CRISPR/Cas系統(tǒng)介導(dǎo)的免疫機(jī)理：當(dāng)病毒首次入侵時(shí)，細(xì)菌會(huì)將病毒的小片段DNA整合到自身的CRISPR間隔區(qū),；當(dāng)病毒再次入侵時(shí),，CRISPR轉(zhuǎn)錄生成一條前體CRISPR RNA（pre-crRNA），pre-crRNA被RNA內(nèi)切酶切割生成含有與病毒靶標(biāo)序列匹配的成熟CRISPR RNA（crRNA）,，該crRNA引導(dǎo)具有核酸內(nèi)切酶活性的Cas蛋白對(duì)靶標(biāo)序列進(jìn)行識(shí)別和降解,。基于CRISPR技術(shù)可實(shí)現(xiàn)快速,、精確,、便攜式的核酸診斷,，有望成為新一代核酸檢測(cè)技術(shù)。

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院任鋒教授團(tuán)隊(duì)利用CRISPR新技術(shù)并聯(lián)合PCR技術(shù),，建立了一種高靈敏性和高特異性檢測(cè)HBV cccDNA的新方法,，該方法的檢測(cè)靈敏度為1copy/μl，優(yōu)于目前現(xiàn)有的檢測(cè)方法,，針對(duì)肝組織進(jìn)行檢測(cè),，陽(yáng)性符合率為72.5%，高于其他檢測(cè)方法,。這一方法的廣泛應(yīng)用將為HBV抗病毒治療的評(píng)價(jià)和停藥后再?gòu)?fù)發(fā)監(jiān)測(cè)提供重要的指導(dǎo)意義,。

這項(xiàng)工作得到了國(guó)家自然科學(xué)基金、北京市自然科學(xué)基金,、首都衛(wèi)生發(fā)展科研專(zhuān)項(xiàng),、北京市醫(yī)院管理中心“登峰”人才培養(yǎng)計(jì)劃及北京市醫(yī)院管理中心“青苗”人才培養(yǎng)計(jì)劃等資助。首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院為唯一專(zhuān)利權(quán)人,，北京肝病研究所任鋒教授、張向穎副教授,、段鐘平教授,、陳德喜教授等為發(fā)明人。